CAMG薄层扫描法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge. var. mongholicus ( Bge. ) Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge的干燥根，主要含有皂苷类、多糖、氨基酸和微量元素等¨。黄芪皂苷是黄芪药效物质基础的重要组成之一，其中黄芪甲苷(ASI)为活性指标成分，具有抗衰老、调节免疫功能、保护心肌和大脑缺血等作用。目前市售黄芪药材多为栽培，而野生较少，因此不同来源药材之间黄芪甲苷含量有较显著的差异，从而影响药材的质量。曾使用高效液相色谱一紫外检测法测定黄芪甲苷含量，但因为其仅在200 nm处有弱的末端吸收，因而操作条件非常严格，噪音对结果影响较大，灵敏度也较差，而CAMG薄层扫描法不受紫外下无吸收成分的影响，且重现性好，是一种良好的黄芪甲苷含量测定方法，本实验采用该法对不同产地黄芪中黄芪甲苷含量进行测定，为黄芪药材质量控制提供实验依据。

1 仪器、试剂与样品

仪器：瑞士CAMAG TLC Scanner，CAMAG半自动点样仪。

试剂与样品：硅胶G薄层预制板(青岛海洋化工厂)，黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所 0781-20008)；其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 供试品的制备 精密称取本品内容物6.2375 g，置圆底烧瓶中，加入甲醇60 ml，80℃ 回流提取4 小时，滤过，残渣同法提取2小时，滤过，合并滤液，滤液水浴蒸干，残渣加水20 ml使溶解，水溶液用水饱和的正丁醇萃取4次(30、30、20、20 ml)，合并正丁醇液，然后用氨试液洗涤2次(20、20 ml)，再用正丁醇饱和的水萃取2次(20、20 ml)，正丁醇挥干，残渣用甲醇定容至10 ml，作为供试品 。

2．2 对照品的制备 精密称取黄芪甲苷对照品 10.10 mg，配成25 ml，作为对照品溶液。

2．3 色谱分析条件展开条件：氯仿-甲醇一水(26：12：4)的下层液。喷以10％硫酸乙醇，105℃显色5~7分钟。反射法锯齿型单波长薄层扫描， λ=536 nm，扫描速度，10 nm/step，分辨率，25 μm。

2．4 空白试验 取不含黄芪的阴性样品，按样品溶液制备供试品，测定，结果空白无干扰。

2．6 稳定性实验 对同一个对照品斑点，分别在 0、30、60、90、120、150、180分钟扫描一次，连续7 次。样品稳定性RSD=0.79％ ：标准品稳定性：RSD = 0.87％。说明本品在3小时内稳定。

2．5 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别点于同一个硅胶G板上，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液显色后进行测定，以峰面积积分值Y为纵坐标，以点样量( μg) X为横坐标作标准曲线：Y=18 511+9 083X，r=0．999 1。说明黄芪甲苷在0.8～4.8 μg范围内线性关系良好。

① 同点精密度(仪器精密度)对同一斑点连续扫描5次，分别测定峰面积，RSD为 0.72％ 。

2．7 精密度试验

② 同板精密度 取样品溶液，在同一薄层板上点样5次，分别测定峰面积，RSD为1.95％ 。

③ 异板精密度 在5块不同板上点同样量同一浓度的对照品，测定其峰面积，RSD为2.52％。

2．8 重现性实验 吸取6份供试品溶液4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，依法测定含量，RSD为3.13％ 。

2．9 回收率试验 见表1。

表1 已知含量样品的回收试验 /mg

2．10 样品的测定 取不同产地的药材，按照供试品液制备项下方法操作，得供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液2 μl，按照上述条件分析测定，结果见表2。

表2 不同产地黄芪样品中黄芪甲苷的含量（n=3）

3 讨论

笔者曾经按《中国药典》2005年版中黄芪药材中黄芪甲苷的提取、纯化方法，但比较繁琐，用 HPLC的方法进行了黄芪甲苷的含量测定，结果噪声比较大，测出的结果重现性差，因此本研究对样品制备方法进行了改进，不使用D101大孔树脂进行分离，反而黄芪甲苷的含量要高出10％左右，说明用大孔树脂进行分离过程中会使一部分有效成分损失。因此本研究采用改进后方法对不同产地的黄芪进行考察，简化了药材的前处理过程，使得药材的分析速度加快，同时也减少黄芪甲苷的损失。通过对不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量进行比较，结果表明不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量有一定的差异，其中甘肃产黄芪平均质量较优。